近年来，多肽类药物凭借其独特的优势逐渐成为人们关注的热点，制备过程中通过对天然氨基酸侧链进行精准修饰，成功构建了一系列结构新颖的多肽类药物。因侧链修饰氨基酸不仅展现出独特的物理化学性质，更获得了特异性的生物活性，从而在药物开发中展现出广阔的应用前景。然而，如何对这些经过侧链修饰氨基酸进行精准序列分析，成为人们面临的一大难题。

岛津提出了使用蛋白测序仪PPSQ梯度系统来应对这一难题的解决方案，实现了对含有侧链修饰氨基酸进行精确序列分析。

① 高灵敏度分析：高灵敏度的流通池可实现PTH氨基酸的高灵敏度检测，从而达到微量样品的序列分析。

② 分析稳定性：该系统配备了高性能检测器和溶剂输送泵，具有很高的分析稳定性，即使在微流量范围内，也能提供出色的泵送性能，进而确保分析的高稳定性。

③ 简单方便的数据分析：使用蛋白质测序仪的专用软件可方便地进行序列分析所需色谱图的后期处理、多个色谱图的叠加以及氨基酸序列的自动推测。

④ 符合FDA21 CFR Part 11规定：与LabSolutions DB/CS共同使用时符合FDA 21 CFR Part 11与PIC/S GMP指南中的要求。

应用案例

PPSQ梯度系统在含有侧链修饰氨基酸

序列分析中的应用

样品描述

组蛋白H4合成肽片段衍生物[Lys(Ac)12/16,Lys(Me3)20]-HistoneH4(1-25)-GSGSK(Biotin)（AnaSpec, Inc, CA），其中第12和第16个残基的侧链被乙酰基（Ac）修饰，第20个残基的侧链被三个甲基（Me）修饰（见图1）。

图1 组蛋白H4合成肽片段衍生物

分析流程

首先，我们使用岛津PPSQ梯度系统分析了PTH-氨基酸混合标准品。分析条件如表1所示，色谱图如图2所示。

其次，确认修饰的Lys残基的洗脱位置 (图3) 。可以检测出PTH-Lys (Ac) 和PTH-Lys (Me3) 的洗脱位置并且不与其他PTH衍生化天然氨基酸峰的洗脱位置重叠。

图3 含修饰氨基酸的Edman降解色谱图

黑色：PTH-Ala；粉色：乙酰赖氨酸(Lys(Ac))；蓝色：三甲基赖氨酸(Lys(Me3))

最后将样品50pmol干燥后进行氨基酸序列分析 (图4) 。结果显示第12位、第16位的赖氨酸（Ac）以及第20位的赖氨酸（Me3）均可在各自的循环中得以鉴定。

图4 序列分析结果

结论

通过使用岛津蛋白质测序仪PPSQ梯度系统，不仅能够准确鉴定合成肽中的天然氨基酸，还能有效分析侧链修饰氨基酸序列。此技术为多肽医药品的鉴定提供了可靠且广泛的应用前景。

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