背景介绍

2025年2月26日，国家药品监督管理局正式颁布YY/T 1954-2025《重组胶原蛋白肽图指纹图谱分析》医药行业标准，拟于2026年3月1日实施。该标准适用于重组胶原蛋白肽图指纹图谱分析，描述了液相色谱-高分辨质谱法测定重组胶原蛋白肽图、覆盖率和异质性分析的方法。该标准由中国食品药品检定研究院归口，四川省药品检验研究院（四川省医疗器械检测中心）、中国食品药品检定研究院和岛津企业管理（中国）有限公司为主要起草单位。岛津中国创新中心使用LCMS-9030全程参与了新标准的研制和验证工作，助您轻松应对新标准的实施。

标准解读

胶原蛋白具有良好的生物降解性和生物相容性，成为应用最为广泛的生物材料之一。近些年，胶原敷料、胶原海绵、胶原凝胶等胶原制品获得医疗器械注册证，广泛用于创面覆盖、止血和非承力软硬组织的修复再生等领域。重组胶原蛋白以其独特的优势，例如精确的氨基酸序列和构型、高纯度、低免疫原性，从而拥有出色的安全性和稳定性，成为医疗和医美市场的新宠。国内已有多种不同表达体系的重组胶原蛋白类产品获批而应用于临床。基于产业的发展和监管的需要，2022年国家药品监督管理局发布《YY/T 1849-2022 重组胶原蛋白》行业标准。然而由于各厂家表达体系、重组工艺、所选核酸序列的长度、重复片段的组合与拼接方式不尽相同，重组胶原蛋白不可忽视的异质性成为该类产品质量评价和质量控制的重要项目。目前针对重组胶原蛋白理化性能表征、生物安全性评价等各项研究正在有序推进。胶原产品属于大分子，可用液相色谱法、MALDI质谱法和凝胶电泳法对其整体性能进行表征。然而上述方法对结构类似的胶原蛋白区分度不足，且对胶原内部精细结构的变化识别能力有限。鉴于此，中国食品药品检定研究院医疗器械检定所与岛津中国创新中心合作开展基于生物信息学质谱分析技术的重组胶原肽图指纹图谱的分析方法建立及应用研究。YY/T 1954-2025行业标准的颁布对不同来源重组胶原产品精准鉴别及产品稳定性评价，为重组胶原蛋白行业规范化、高质量发展提供了依据，也为中国生物经济战略的实施注入了新动能。

图1. YY/T 1954-2025《重组胶原蛋白肽图指纹图谱分析》医药行业标准发布稿

肽图指纹图谱法是将重组胶原蛋白样品用适宜的蛋白酶酶解(如胰蛋白酶),用高效液相色谱进行分离获得肽图指纹图谱;利用高效液相色谱-高分辨率质谱技术进行分析得到多肽一级、二级谱图,然后与理论氨基酸序列酶解肽段匹配,进行胶原蛋白肽段覆盖率分析,用于评价重组胶原蛋白的符合性。利用肽图指纹图谱可进行异质性分析。例如，N端、C端修饰,以及各种其他翻译后修饰(如脱酰胺化、氧化、异构化、碎片化、二硫键错配、N-连接和 O-连接的寡糖、糖基化、聚集等)，评价产品工艺的稳定性。

岛津解决方案

岛津公司是著名的分析仪器制造厂商，岛津四极杆飞行时间质谱仪(LCMS-9030)具有稳定性好，准确度高，灵敏度高和采集速度快的优点。其高通量非靶向检测功能（DIA）在蛋白质鉴定中正发挥越来越大的作用。基于准确的色谱保留时间，ppm级的质量准确度，真实同位素峰形和高分辨特征碎片离子信息，LCMS-9030同时具有蛋白质定性和定量的能力，适用于蛋白类产品的精准鉴别和生产工艺稳定性评价。

分析仪器

图2. 岛津液相系统Nexera LC-40 +高分辨质谱仪LCMS-9030

分析条件

色谱柱：Shim-pack Arata Peptide C18（粒径 2.2um, 150 mm x 2.0 mm）。

流动相为：0.1%甲酸水溶液，0.1%甲酸60%乙腈水溶液

流速：0.3 mL/min梯度洗脱

柱温：30℃

质谱：离子源：ESI（+）

图3.某重组胶原产品的肽图

图3为某厂家采用酵母菌表达的重组人III型胶原产品的肽图。该胶原含有474个氨基酸，包括16个赖氨酸和23个精氨酸。采用胰蛋白酶酶解，其余473个氨基酸均被高分辨质谱有效识别，肽段覆盖率为: 99.79%。异质性分析结果显示该重组胶原产品主要修饰类型为甲硫氨酸氧化、天冬酰胺脱酰胺化、谷氨酰胺脱酰胺化、天冬酰胺脱胺化和焦谷氨酸化。

结论

在重组胶原蛋白医疗和医美市场蓬勃发展的今天，重组胶原蛋白产品的质控显得尤为关键。岛津公司先进的分析技术助力重组胶原肽谱新标准的颁布。未来，我们期待与更多的医药监管机构和科研团队携手合作，共同推动医药检测技术的进步与发展，为人类的健康事业贡献更多力量。

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