随着低分子药物逐渐被抗体药物等生物药物所取代，中分子药物正在逐渐被人们所关注，虽然这些生物药物展现出了许多优势，但也面临一些难题，例如制造成本高以及由于分子量大而难以进入细胞内部等问题。为了解决这些难题，中分子药物受到了广泛关注，通过肽合成产生的多肽类药物是中分子药物的一种。在多肽类药物的生产质控中，氨基酸序列的测定是非常重要的检测项目。对于常规组成单一的合成多肽药物来说，氨基酸序列的分析较为简单，可通过Edman降解法或质谱法进行测定，其中Edman降解法被认为更加直接可靠。

岛津最新款蛋白测序仪PPSQ-51A/53A等度系列以Edman降解法为基础，将蛋白质N-端顺次切断进行序列分析，产品具有灵敏度高、等度洗脱、简便数据处理（差减色谱图）、符合FDA 21 CFR part11规定、自动生成报告、长序列分析等特点，可以实现更灵敏、更可靠的蛋白质N-端端氨基酸序列分析，能够满足用户对微量样品氨基酸序列的蛋白质鉴定分析的各种需求。

【应用案例】

PPSQ-51A/53A等度系列在进行醋酸格拉提雷分析中的应用

应用介绍

醋酸格拉提雷是由四种氨基酸（L-谷氨酸（Glu）、L-丙氨酸（Ala）、L-酪氨酸（Tyr）、L-赖氨酸（Lys））构成的、具有随机排列特性的多肽混合物，其平均分子量在5000到9000之间。通过对醋酸格拉提雷的氨基酸组成进行分析，已经确认了各氨基酸的摩尔比例。使用蛋白测序仪对醋酸格拉提雷的氨基酸序列进行分析时，由于醋酸格拉提雷是具有随机排列特性的多肽，虽然不能直接定量各氨基酸，但可以通过计算每种组成氨基酸的比率，从而确定N末端各氨基酸的摩尔比例。

例如，Glu的相对摩尔含量为：

Glu 相对摩尔含量=mol(Glu) / mol(Glu)+ mol(Ala)+ mol(Tyr)+ mol(Lys)

样品制备及分析（等度系统）

使用的醋酸格拉提雷样品为 Tront Research Chemicals Inc. 公司生产（代码：G406800）。将准备好的醋酸格拉提雷溶解于乙腈 / 0.1% 三氟乙酸水溶液 = 1:1 (体积比) 的混合溶液中，制备成浓度为 2 µg/µL 的样品溶液。

图1分析结果（色谱图）

将制备的样品溶液 3 µL 使用蛋白序列分析仪 PPSQ-51A/53A 等度系统进行了氨基酸序列分析。样品保持体采用了聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，分析结果（色谱图）如图1所示。

图2各循环中构成氨基酸残基的摩尔比（PVDF膜） 左：摩尔比的表格 右：摩尔比的图表

使用制备的样品溶液进行了相同的分析三次，图2显示了使用PVDF膜的分析结果，图中的左侧表格显示了从色谱图中获得的每种氨基酸的产量除以四种氨基酸总量的值（摩尔比），使用PVDF膜进行的三次摩尔比分析中，获得了良好的重现性结果（图中的右侧）。

结论

本案例涉及使用蛋白序列分析仪 PPSQ-51A/53A 等度系统对由Glu（谷氨酸）、Ala（丙氨酸）、Tyr（酪氨酸）、Lys（赖氨酸）这四种氨基酸组成的具有随机序列的多肽复杂混合物——醋酸格拉提雷进行的分析。我们计算了所得PTH-氨基酸的产率比例，并确定了前5个循环中从N端部分获得的每种氨基酸的相对摩尔比。

虽然氨基酸组成分析可以确定所有氨基酸的组成，但在确定末端部分的氨基酸组成方面存在困难，同时也证明使用蛋白序列分析仪 PPSQ-51A/53A 等度系统在对于醋酸格拉提雷的N端部分的质量控制是有益的。

关联仪器

蛋白测序仪PPSQ-51A/53A等度系列

①分析稳定性：蛋白测序仪PPSQ-51A/53A等度系列等度分离苯乙内酰硫脲（PTH-氨基酸）。此举改进了基线稳定性并支持苯乙内酰硫脲 （PTH-氨基酸）的高灵敏度分析。等度序列分析提供更稳定的保留时间，因此，可采用差减色谱图处理取消前述周期检测到的峰值，更容易识别序列。

②简单方便的数据分析：使用蛋白质测序仪PPSQ-51A/53A等度系列的专用软件可方便地进行序列分析所需色谱图的后期处理、多个色谱图的叠加以及氨基酸序列的自动推测。

③符合FDA21 CFR Part 11规定：实验室所使用的设备，需要符合计算机系统化验证(CSV)、FDA 21 CFR Part11, PIC/S GMP指南、日本厚生劳动省电子记录/电子署名相关的政策等规定。通过安全策略、系统策略、用户权限及用户管理功能等手段，可在高效地运用系统的同时，实现符合这些限制条件的要求。

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