在生物医药领域，多肽药物因其高特异性和低毒副作用而展现出巨大的治疗潜力。然而，多肽药物的稳定性和生物活性常常受到其聚集体形成的影响。多肽药物中的聚集体既有共价结合聚集体，也有非共价结合聚集体，后者因为非特异性互相作用力弱，易受聚集体与尺寸排阻色谱柱间的相互作用力而发生状态变化，为分析工作造成困难。

在此背景下，分析这两种聚集体对多肽药物稳定性的研究显得尤为重要。为此岛津基于生物惰性液相开发了一种可以同时检测多肽药物中共价结合二聚体和非共价结合二聚体的方法，为相关研究工作者提供参考。

样品准备：共价结合二聚体、非共价结合二聚体、多肽药物非破坏样品和通过强制降解实验得到的多肽药物破坏样品，使用洗脱液适当稀释后制备成待测溶液。

分析条件：

仪器：岛津生物惰性超高效液相色谱系统Nexera XS inert

色谱柱：SHIMSEN Ankylo SEC-120（300×7.8mm I.D.,3.0μm）

洗脱液：100mM硫酸铵水溶液（含20%乙腈+0.1%TFA）

检测波长：220nm

其他条件略

n  分离度评价

基于上述分析条件，将共价结合二聚体和非共价结合二聚体加入多肽药物非破坏样品中，以评价分离度。分析结果显示，三个目标峰的分离度大于1.5，说明分离度良好。

多肽药物、共价结合二聚体和非共价结合二聚体色谱图

分离度结果

n  重复性考察

将分离度评价使用的样品重复进样6次，以考察重复性。6次重复进样结果显示，三个目标峰保留时间和峰面积的RSD分别在0.024%~0.025%、0.048~0.130%，说明重复性良好。结果如下：

多肽药物、共价结合二聚体和非共价结合二聚体重复进样色谱图（n=6）

重复性结果（n=6）

n  破坏样品分析

将多肽药物破坏样品按照开头分析条件进样分析，得到结果如下：其中在多肽药物破坏样品中，检测到非共价结合二聚体（杂质），峰面积百分比为6.934%，未检测到共价结合二聚体。

多肽药物破坏样品色谱图

破坏样品分析结果

n  总结

本研究使用岛津生物惰性超高效液相色谱系统建立了一种用于检测多肽药物中的非共价结合二聚体及共价结合二聚体杂质的新方法。

生物惰性超高效液相Nexera XS inert可耐受高盐洗脱液，无金属的设计避免了金属敏感型物质的吸附；SHIMSEN Ankylo SEC 120色谱柱及其洗脱液的配方，最大限度*地降低了聚集体杂质与色谱柱之间的非特异性相互作用，从而实现良好的分离效果。该方法展现出良好的分离度和重复性，适合用于多肽药物中共价结合二聚体和非共价结合二聚体杂质的含量测定与评估。

ü  更大限度降低因金属吸附而造成的损失

ü  轻松应对高盐浓度和极端pH流动相的挑战

ü  获得卓越的灵敏度、重现性和分离度

*注：文中涉及最大等程度类描述，仅限于实验组别对比结果

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