在生物制药领域，抗体药物的生产过程通常是一个复杂而多阶段的流程，包括从细胞培养到最终分析的多个步骤。在这一过程中，不仅要选择合适的细胞株以及优化培养条件，最大限度抑制聚集体形成；同时由于糖链的不同导致抗体活性差异，还要进行监测及优化，以确保最终产品的纯度和生物活性。而这些流程往往需耗费大量人力和时间。

除此之外，聚集体分析常采用尺寸排阻色谱法（SEC），在分析前需要对目标蛋白质进行纯化前处理，这进一步增加了分析的复杂性。基于对质量评估的严苛要求，研发一个能够无缝对抗体进行糖链及聚集体评估的自动化分析系统显得尤为必要。

针对这一挑战，岛津推出生物惰性超高效液相Nexera XS inert和液体处理器 LH-40的组合，为实现抗体药物中糖链及聚集体分析的自动化提供参考，详情如下：

1预处理（粗纯化）

样品使用培养天数不同的抗体培养上清液（第4，7，12天），在粗纯化之后进行糖链分析及聚集体分析。

将第4，7，12天培养上清液分别取500μL，在下表条件下进行纯化。由于进样量相同，通过比较5.7min附近IgG抗体的峰面积值估计产量，结果显示培养天数越多，IgG抗体的产量越高。

粗纯化条件

粗纯化后的各培养上清液色谱图

2糖链分析

使用LH-40从第1步纯化获得的抗体馏分（上图中的黄色框内峰）中抽取40μL进样，并在下表的条件下进行糖链分析。此次培养的抗体被认为其抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（ADCC活性）越高，作为抗体药物的效果也越好，高ADCC活性的糖链修饰状态在峰3处洗脱。通过色谱图对比可以看出，而随着培养天数的增加，峰3的吸光度在下降，说明ADCC活性在下降。

糖链分析条件

各培养上清液中抗体糖链分析色谱图

糖链分析的各峰面积%

3聚集体分析

使用LH-40从第1步纯化获得的抗体馏分中抽取20μL进样，按照下表条件进行聚集体分析。结果表明，随着培养天数的增加，聚集体的比例增多。综上所述，这表明在此培养条件下，第四天的回收是最优的。

聚集体分析条件

不同培养天数的培养上清液中抗体聚集体分析色谱图

不同培养天数的聚集体峰面积%

4结论

从Protein A纯化的结果来看，随着培养天数的增加，抗体产生量会变多，但通过糖链及聚集体分析来看，高活性抗体的比例会减少，聚集体的比例也会增加，综合来看，选择在第四天中回收是最合适的。

上述分析过程中，采用生物惰性超高效液相Nexera XS inert有效解决抗体金属吸附带来的灵敏度和重复性问题，以及提高分析效率；液体处理器LH-40集成了自动进样和馏分收集两大功能，通过Nexera XS inert与LH-40的组合建立了全流程的自动化，实现了从Protein A纯化到抗体糖链分析及聚集体分析的完整分析系统。

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