在生物体内包含有各种功能的蛋白质，这些蛋白质经过处理后成为成熟蛋白质并被释放到细胞外，它们在相互作用下可能会导致疾病。为了了解这些疾病的病因、并在疾病的预防、诊断、治疗及药物开发研究等方面取得进展，鉴定微量样品氨基酸序列的蛋白质鉴定分析工作就变得越来越重要。

蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。对蛋白N-端测序中常用Edman降解法，其基本原理包括三个主要的化学步骤：①异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联、②苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解、③噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸），每个循环从蛋白质与多肽裂解出一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。此原理设计出的自动分析仪进行分析时，能够可靠地测定肽链的30个左右氨基酸残基序列，最多可以分析50-60个氨基酸残基。

岛津最新款蛋白测序仪PPSQ-51A/53A梯度系列以Edman降解法为基础，将蛋白质N-端顺次切断进行序列分析，产品具有灵敏度高、等度洗脱、简便数据处理（差减色谱图）、符合FDA 21 CFR part11规定、自动生成报告、长序列分析等特点，可以实现更灵敏、更可靠的蛋白质N-端端氨基酸序列分析，能够满足用户对微量样品氨基酸序列的蛋白质鉴定分析的各种需求。

【应用案例】

PPSQ-51A/53A梯度系列在进行微量蛋白分析中的应用

★ Calmodulin的氨基酸序列分析

使用岛津蛋白测序仪PPSQ-51A/53A梯度系列，在下述的分析条件（表1）下对500 fmol的PTH-氨基酸标准品进行分析与矫正，从结果（图1）可以得出该产品满足进行微量PTH-氨基酸混合溶液的检测要求。

将Calmodulin（Merck cat#C4874）溶解于0.1%三氟乙酸水溶液中，调制浓度为1 pmol/µL的样品溶液。在经过聚凝胺处理的玻璃纤维盘中添加2µL的样品溶液，进行氨基酸序列分析。

各循环色谱图（图2）所示，其中第1个循环的色谱图作为原始色谱图，之后循环的色谱图使用差减色谱图表示。所有的30个循环内，我们都能够检测到PTH-氨基酸并鉴定氨基酸序列，并且结果与理论序列一致。

图2 Calmodulin氨基酸序列分析的色谱图

【结论】

岛津最新款蛋白测序仪PPSQ-51A/53A梯度系列在蛋白质的N末端部氨基酸序列分析中，即使是微量样品情况下，也可以完成氨基酸序列鉴定工作。其在无数据库支持情况下，也可完成微量样品的蛋白质结构分析，是蛋白质的氨基酸序列分析工作中的重要工具。

①高灵敏度分析：高灵敏度的流通池可实现PTH氨基酸的高灵敏度检测，从而达到微量样品的序列分析。

②分析稳定性：该系统配备了高性能检测器和溶剂输送泵，具有很高的分析稳定性，即使在微流量范围内，也能提供出色的泵送性能，进而确保分析的高稳定性。

③简单方便的数据分析：使用蛋白质测序仪的专用软件可方便地进行序列分析所需色谱图的后期处理、多个色谱图的叠加以及氨基酸序列的自动推测。

④符合FDA21 CFR Part 11规定：与LabSolutions DB/CS共同使用时符合FDA 21 CFR Part 11与PIC/S GMP指南中的要求

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