前言

雪卡毒素(也称西加毒素)中毒是由雪卡毒素（CTXs）引起的，是世界上常见的食物中毒来源之一，据调查，CTXs每年大约造成5万人中毒，是造成人类中毒分布最广、人数最多的一种海洋毒素之一。目前发现CTX的类似物有30余个。

雪卡毒素是一种由底栖甲藻产生的热稳定脂溶性聚醚毒素，在天然样品中以微量存在，当浓度达到0.2μg/ kg时具有神经毒性作用，CTXs的半数致死量（median lethal dose，LD 50）为0.45 μg/kg，比河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）的毒性还要强100倍，是重要的神经毒素。美国 FDA 和 EFSA 建议控制水平为 0.01 μg CTX1B 当量/kg。

根据岛津新发布的一项技术，通过向流动相中添加非常少量的碱金属（如Na+和Li+）来优化一种使用钠和锂加合物[M+Na]+和[M+Li]+离子检测CTXs的高灵敏度方法。通过这项技术，可以使用LCMSMS成功分离及检测FDA推荐的低浓度的CTXs。本文介绍了[M+Li]+新方法的分析条件和准确度。

CTXs标准品

• 1、5种CTX类似物的标准品由JFRL（日本食品分析中心）提供

• 2、9种CTX类似物的混标样品由NIHS（日本国立医药品食品卫生研究所）提供

分析条件

仪器型号Nexera X3 UHPLC+LCMS-8060NX

分析结果

1、[M+Na]+或[M+Li]+离子的形成和碰撞能（CE）的优化

在流动相中添加Na+或Li+会通过阳离子化增加钠或锂加合物的形成。为了获得所需的离子[M+Na]+或[M+Li]+ ，可在流动相中加入微量碱金属。下图为不同流动相条件下CTX1B的分析示例，本研究中分析的其他目标化合物也获得了相同的结果。当向流动相中添加Li+时，未检测到 [M+Na]+。这些结果表明，可以通过使用[M+Li]+等替代离子来实现更高的灵敏度。

考察不同流动相条件下CTX1B的分析结果（SIM）

但是，[M+Na]+和[M+Li]+母离子没有提供任何有用的产物离子，因此优化CE用以监测[M+Na]+>[M+Na]+或[M+Li]+>[M+Li]+在MRM分析模式下提供最高的信噪比。CTX1B的优化CE如下表所示。其余8种类似物的最佳CE以类似的方式进行了优化。

CE与峰面积或信噪比之间的关系

2、改善色谱峰分离度和灵敏度

在下图中，比较了使用文献方法、添加Na的流动相（b）和添加Li的流动相（c）对目标化合物的分离。2,3-dihydroxyCTX3C和51-hydroxyCTX3、49-epi-CTX3C和CTX3C、CTX4A和CTX4B在新条件下表现出明显更好的分离。除2,3-dihydroxyCTX3C和51-hydroxyCTX3外的6种类似物和CTX3C在加Na流动相中具有良好的灵敏度。实验证实，使用添加Li的流动相时，9 种CTX类似物的灵敏度相当。

9 种CTX类似物的MRM色谱图（1 ng/mL NIHS混标样品）

3、定量限（LOQ）的评估

使用JFRL标准品生成校准曲线，以确认[M+Li]+> [M+Li]+ 。校准曲线最低点的每个色谱图如下图所示。确定校准曲线的范围，使每个校准点的3次重复分析的平均准确度为100±5%，并指定最低点作为 LOQ。用5 g鱼肉制备1 mL测定溶液时，5种标准品的LOQ范围为0.0004至0.0012μg/kg。

校准曲线最低点的MRM色谱图

小结

岛津最新的技术介绍了一种通过向流动相添加微量碱金属（如Na+和Li+）来提高CTX检测灵敏度的方法。这项工作成功证明了使用LC/MS/MS在低浓度下分离和检测CTX类似物，符合FDA限度要求。

注：本产品仅用于研究，不能用于医疗诊断目的。