第五期

液相色谱中输液压力异常上升时的处理方法

前言

经常有用户打电话询问“柱压力升高!不更换不行了?”然而再查找原因时发现是因为输液装置达到压力上限设定（Pressure max)，输液泵停住了。实际上往往不是色谱柱的问题，而是其他的地方堵住了。本文就此问题开展讨论。

输液压力异常上升时可能产生的问题

首先，看一下压力异常上升时引起的问题：

01柱填充剂受压过大时会发生填充剂的损坏，形成扁平状态，挤向深处。因此受到更大的压力。入口填充处产生间隙则峰变形。在排阻色谱上由于孔隙变小，分离也会变差。

02检测池所受的压力过大时，会导致漏液，严重时破坏检测池。

03配管、过滤器被不溶物堵塞时，液体流通不畅，并且可能产生色谱峰变形。

04输液压力过高时，不能按所设定的流量输液。而且缩短易耗品的使用寿命。

为及早发现异常，在设定输液装置的Pressure max时，建议为柱耐压的1/2~2/3，如果输液装置和进样器之间有阻尼管 (如图1)或高灵敏度阻尼器、前置柱时，由于它们也会承受压力，Pressure max的设定值应增加这部分压力。

1首先观察流动相瓶

如果见到流动相瓶中有白色混浊时肯定是不溶物，会堵塞流路的物体。虽然有吸滤器过滤，但在很接近溶解度的状态下放置后会析出。即使纯水，放置后也会有细菌繁殖。另外，缓冲液和有机溶剂的梯度洗脱，须预先在烧杯或烧瓶中确认混合后有没有析出。有机溶剂相互间会根据混合比也可产生白色混浊。白色混浊析出时，除清洗流路以外，必须再研究一下流动相。

2从尾端开始进行流路检验

为了寻找压力异常上升的地方，基本上从尾端一侧依次卸下配管，输液，检查压力。如果很快达到Pressure max时，降低流量进行。

首先，卸下图1中的接头①(检验背压管)进行输液。如果压力下降(100KPa以上)，则是背压管堵塞。如果压力未下降再往上流找堵塞的地方，卸下一个接头②(检验检测器)，进行检查。同样地依次检查、③(分析柱)、④(保护柱或线路过滤器)、⑤(进样器)、⑥(阻尼管，前置柱)等、⑦(输液装置的线路过滤器)等。

根据需要，其他的连接件也分别卸下。如果配管和检测池、过滤器、进样器本身有数百个KPa以上的压力的话，则有问题。(但是，使用半微量配管时，有数百个KPa压力为正常)。容易堵塞的地方有过滤器与细配管的入口处应特别注意。

在检验柱温箱内的流路时，由于在柱温箱打开的状态下，也就是接近室温的情况下进行，如仍按分析时的流量不变时，有可能柱承受压力过大，通常用一半的流量问题不大。

3流路各部分解决措施

如果确定是流路中的堵塞，有的可以溶解洗净，有的不能洗净(表1)应采取反向清洗或更换配管部分。

4配管管道

在流路中最容易堵塞的地方是配管管道，尤其是由内径粗的管向细的管的接缝处，或流路拐弯处(图2)。

在配管的入口一侧切掉25px，也是一种解决办法(为此，在接口上使用手拧的PEEK头很方便)。检测池的压力极高时，为防止损坏，将池拆卸后清洗。

柱压稍微高时，首先检查色谱柱(用出厂时检查条件进行理论塔板数测定)，看看是否能满足使用目的。压力极高时，建议更换柱。但是堵塞如果是在入口侧柱端的过滤器时，虽不能保证但可用下述办法试着恢复：

① 试用流量的一半，进行反冲。

② 检查入口侧柱端的压力(图3在过滤器与柱端为一体时)。压力高时，用超声波清洗，如不能改善，更换柱端过滤器。

如果入口侧过滤器经常堵塞时，在与进样器之间安装线路过滤器可得到改善。但是，可能导致色谱峰变宽。

5线路过滤器、进样器

如果问题出在线路过滤器、进样器，则可采用反冲或拆卸后用超声波清洗。

特殊情况下解决方法

1仪器长时间未使用

试样溶液一定要经膜滤器过滤。

隔了好久再使用时，或对以前的使用条件不清楚时，首先，在没有色谱柱的状态下，清洗流路，待清洗干净后，再考虑将柱子接上使用。

2低流量输液，压力仍然极高时

低流量输液也很快达到Pressure max时，要考虑问题很可能在前端，所以不从尾端开始拆卸，而是拆卸整个流路，相反，从前端部分开始分别与输液装置的连接，进行检查。

3每次注入试样时压力缓缓上升

这种情况下应考虑，试样中是否有不溶物；或者，虽然溶于试样溶剂，但在流动相中不溶解而析出，从而使管路堵塞，压力上升。

4注入时稍许上升后又下降

这时应考虑试样成分的溶解度不够，导致试样溶剂与流动相混合时的粘度阻力压上升。

日常注意事项

1流动相和试样溶液要过滤

流动相和样品溶液，特别是样品溶液一定要经膜滤器过滤。然后，将梯度洗脱溶液混合，以及将流动相与样品溶液混合确认是否有不溶物产生。

2养成记录分析时压力的习惯

为及时发现偏差，应记录日常分析时的压力。

3输液装置的压力调零

为了准确进行压力监控，应定期地进行零点调整。调零时，打开排液阀在没有液流的状态下进行。

4分析结束时检测器的出口管末端的处理

检测器的出口管(背压管)末端，因接触空气，是管内溶剂容易蒸发的地方，可以使用“封口胶”封堵。

本文内容非商业广告，仅供专业人士参考。