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brdu细胞周期实验步骤
发布时间:2020-07-16]  阅读次数:1777次

来源:分析测试百科网

  1、细胞生长至指数期时,向培养液中加入BrdU,使最终浓度为10μg/ml。

  2、44小时加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。

  3、48小时后常规消化细胞至离心管中,注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。

  4、常规染色体制片(见第三部分:染色体技术)。

  5、染色体玻片置56℃水浴锅盖上,铺上2×SSC 液,距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。

  6、弃去2×SSC液,流水冲洗。

  7、Giemsa液染色10分钟,流水冲洗,晾干。

  8、镜检100个分裂相,计第一、二、三、四细胞期分裂指数。

  9、计算:

  细胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小时)

  附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十双蒸水10ml 4℃下避光保存。

  (2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,柠檬酸三钠•2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。

  注意事项:BrdU溶液需要避光保存在 4℃冰箱,SSC溶液也需要4℃保存,可根据实验需要分装后高压灭菌


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