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原创 | 菌浓度摸不准怎么办?
发布时间:2019-02-20]  阅读次数:697次

来源:分析测试百科网

  培养基适用性检查是每个药企、医疗器械企业都会遇到的,很繁琐。但培养基企业提供的适用性报告又不能代替自己做的,很是让人头痛。

  该检查会用到多种微生物菌种,以药企常见的TSA为例,某培养基厂家提供的检测报告用到了7种菌。

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  药典里没要求这么多,但也有好几种。这些微生物,刚从液氮或者冻干粉复融的需要预培养一代。在接种到样品培养基和对照培养基时,需要做计数。要求接种浓度小于100cfu。这里的操作药典一笔带过,留给新人是一堆烦琐事:

  比如说我该怎么确定菌浓度?

  在老版,应该是2005版药典中,还有麦氏比浊管做菌浓度的指导。就是把菌悬液和麦氏比浊管做比较,大约的得出一个浓度,但现在取消了这种方法。

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(麦氏比浊管已经退出药典了,但在某宝上依然可以搜到,感兴趣的可以试试。)

  新人往往陷入一种误区,“我要先涂平板培养,得出我的菌浓度,然后选择合适的那个浓度来接种到样品和对照培养基上。”想法很好,实操性很差。

  毕竟,等你培养好了,几天都过去了。而且药典里还很明确的规定,“菌悬液若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在2-8℃可在24小时内使用,黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃,在验证过的贮存期内使用。”

  这预示着,你的方法行不通,因为24小时内,你的菌落可能都没冒头。尤其是黑曲霉之类的,三天才可能刚刚形成菌落。怎么办?应该验证保存期限?嗯,绕进死胡同了。

  我的“笨”办法↓↓

  其实完全可以这样,我把微生物培养好后,直接取菌悬液按1:10、1:20、1:40、1:80---系列稀释后(具体该从多少倍稀释,完全可以根据个人经验与喜好),每个浓度都接种到样品培养基和对照培养基上。这样只要有一个浓度是合适的,我的结果就可以用了。至于是其他的不适合的浓度,直接排除掉。

  我想您应该不会从1:10:1:20系列稀释到1:1000吧,这样老板会气疯的,毕竟以TSA对照培养基为例,300ml的量为一袋,而300毫升最多可以倒20个平板。而一袋的价格已经超过七八十块了。当然,R2A琼脂对照培养基更贵,一袋300ml配制量,卖一百多。如果稀释的倍数太多,导致对照培养基消耗量超过预算,我可不负责的哈。

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刚刚在某宝搜了下价格,对照培养基确实不便宜。

  我们一般选取菌落数在50-100之间的。太少了,容易有偏差。20个相差2个,和80个相差2个,比例对比差太多了,所以最终菌落数目千万不要太少。当然,这样做会浪费对照培养基,但考虑到多次开启洁净室空调及其生物安全柜的电费,还有人工时间成本,这样做其实非常经济实用。



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