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定量PCR仪扩增工作原理

    定量PCR仪其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同，只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记，使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统得出量化的实时结果输出。把这PCR仪叫做实时荧光定量PCR仪(qPCR仪)。荧光定量PCR仪有单通道，双通道，和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候，选用单通道，有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记的目的基因表达产物，因为一次只能检测一种目的基因的扩增量，需多次扩增才能检测完不同的目的基因片段的量。该仪器主要用于医学临床检测，生物医药研发，食品行业，科研院校等机构。

定量PCR仪如何操作？
 
(1)接通电源开关，PCR仪进入准备状态;在显示屏上记录了当前PCR仪的温度和盖子(Lid)的温度。若PCR仪正在运行时，须按“ B ”键(start/stop)，才能退出运行并返回准备状态。
 
(2)编写程序段。在准备状态下按“ C ”键(programs)进入编程状态，选定一程序号，然后按“enter”键，进入下一程序;按 “A”(list)键后，选一文件号(empty program);再按“enter”键，进入下一程序;按“ABC”键，进入下一程序，用上下左右键号选择一个字母(A、B、C、D、…)，然后按“enter”键，进入下一程序;按“name ok”键，完成文件命名。
 
(3)设定盖子的温度。“lid temp： ℃”，盖子的温度一般比变性温度要高10℃，例如变性温度是95℃，那么盖子的温度就要设定为105℃。待盖子预热后按“enter”键，进入下一程序。
 
(4)设定变性温度、变性时间、延伸温度、延伸时间、退火温度、退火时间及循环总数等参数。从*步依次按“enter”键进入，用四个移位键移动设定位置。先设定温度，后设定时间，全部参数设置完后，按“pgm ok”键，所设定的程序自动被保存。
 
(5)运行程序。检查设定是否正确， 按“start”键，选择设定好的程序，开始运行。显示屏上可观察到系统运行的情况，按“Stop”可停止运行。