来源：分析测试百科网

实 验 名 称：紫外可见分光光度法测定维生素B₂

实 验 目 的：1、维生素B₂的紫外可见光谱图的测绘

2、根据E^1%_1CM444nm文献值323求取样品中VB₂的含量

3、用标准曲线法求取样品中VB₂的含量

4、比较两种方法的误差来源

实 验 原 理：维生素B₂，通常指核黄素。维生素B₂在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一般取444nm的波峰为定量吸收峰，除了用一般的工作曲线法外，还可按C₁₇H₂₀N₄O₆ 的吸收系数（E^1%_1CM444nm）为323计算，求取样品中维生素B₂的含量。

实 验 器 材：Cary100UV-Vis分光光度计、冰醋酸（AR）、氢氧化钠1mol/L（AR）、维生素B₂标准试剂（0.3mg/ml）、药片（含维生素B₂片）。

实 验 步 骤：1、取待测片剂20 片，精密称定、研细，精密称取适量（约相当于维生素B₂10mg），置于1000ml容量瓶中，加冰醋酸5ml与水100ml，置水浴（100℃）加热1小时，时                          时摇振，使维生素B₂溶解，加水稀释，冷却后加氢氧化钠液（1mol/L）30ml。用水稀释至刻度，摇匀，过滤；弃去初滤液，取续滤液，在444nm波长处测定吸收度，                          

C₁₇H₂₀N₄O₆的吸收系数（E^1%_1CM444nm）为323计算。

2、用移液管分别吸取2ml、4ml、5ml、6ml、8ml维生素B₂标准试剂（0.3mg/ml）于5个100ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。用紫外分光光度计分别测量5个容量瓶中的VB₂稀释液，得到5个吸收度数值A_444nm。以VB₂稀释液浓度为横坐标， A_444nm数值为纵坐标，建立VB₂浓度与吸收度的标准曲线，然后测出待测液的吸收度数值，在标准曲线上找到相应的浓度数值即可。