来源：分析测试百科网

免疫荧光染色

使用预冷的 PBS 缓冲溶液洗涤细胞，去除残留的培养液。立即加入 4% 多聚甲醛(PFA)固定液。在室温固定15 min。用 PBS 洗涤残留的固定液后，用 0. 5% Triton X-100 处理细胞 5 min，这样可以通透细胞膜，使抗体等大分子能通过细胞膜，进到固定细胞的内部。但这样处理会破坏细胞膜。

PBS 洗去通透溶液。在含有 1% BSA 的 PBS 溶 液中孵育细胞，常温封闭细胞 30 min。其目的是封 闭细胞和玻璃片，减少抗体的非特异性吸附，从而减 弱背景。如果仅使用荧光标记的小分子或化合物， 可不进行此步骤。一抗结合。把抗体稀释到含有1% BSA的PBS溶液中，孵育细胞1 h或4 °C过夜。抗体的使用浓度一般为0.1~10μg/mL。由于不同的抗体亲和性和识别能力不同，应根据抗体的性质进行调整。用含有 1% BSA 的PBS 溶液洗涤细胞 3次，每次 5 min，以去除多余的抗体。再使用荧光标记的二抗或染料，稀释在含有 1% BSA 的 PBS 溶液中，室温孵育 1 h。整个过程需要注意避免强光，防止荧光基团的淬灭。再用 PBS 洗涤玻璃片，去除残留的荧光染料或者抗体。最后去掉玻璃片上多余的PBS，并用封片剂封片。待封片剂凝固后，即可进行激光共聚焦显微镜观察。