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低光毒性与高分辨率之间的矛盾

      LSCM 还面临着高分辨率和低光毒性间相互矛盾难以平衡的问题，提高图像分辨率需要加强荧光信号，增强激光照射功率和时间，这种光的强度通常比一个典型的宽场荧光显微镜荧光灯强度超过 1000 倍以上，从而造成光漂白导致的光毒性，降低染料荧光寿命和样品的存活率等。而在现有的技术制约下，降低光毒性意味着减少激光照射功率和时间，不利于荧光信号的收集。目前，许多新技术如光门控、磷砷化镓混合检测器、高速扫描、光片技术、超高分辨率等，都是以降低背景信号，增强灵敏度，在使用较弱功率激光下提高信号强度为目的。但从总体上来看在降低光毒性等方面的改良还不尽完美，在实际观察中往往很难达到极限分辨率。