来源：分析测试百科网

分子荧光光谱法测定维生素B2的含量

A. 实验原理
常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外—可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。固定一个假设的发射波长进行激发波长扫描，找出最大激发波长λex，然后固定最大激发光波长λex进行荧光发射波长扫描，找出最大发射波长λem。最大激发波长和最大发射波长的选择是本实验的关键。
在稀溶液中，荧光强度与物质的浓度呈线性关系。由于荧光物质具有猝灭效应，此方法仅适用于痕量物质分析。
维生素B2也称核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。易溶于水，而不溶于乙醚等有机剂。光照易分解，对热稳定，在中性或酸性溶液中稳定，在碱性溶液中较易被破坏。维生素B2水溶液在430～440 nm蓝光或紫外光照射下会发出绿色荧光，荧光峰在525 nm附近，在pH为6-7的溶液中荧光强度最大。最大激发波长λex=465 nm，最大发射波长λem=520 nm。pH=11时，荧光消失。维生素B2在水溶液中稳定。在稀溶液中，其荧光度与维生素B2溶液浓度呈线性关系。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质光黄素，光黄素也能发出荧光，其荧光强度比维生素B2强，所以测量维牛素B2的荧光时要控制在酸性和避光条件下进行。
B. 仪器、试剂
1．仪器
RF-530IPC荧光分光光度计；电子天平
移液管(2 mL)；棕色容量瓶(50 mL、1000 mL)。
2．试剂
维生素B2;冰醋酸（分析纯）；多维葡萄糖粉（含有维生素Bi、维生素B2、维生素C、维生素D和葡萄糖）。
3．标准溶液的配制
维生素B2标准储备液（10μg·mL^-1）：准确称取10.0 mg维生素B2，用热去离子水溶解后，转入1000 mL棕色容量瓶中，冷却后加去离子水至刻度，摇匀，置于暗处冰箱内保存。
C. 实验步骤（略）
D. 注意事项
(1)吸量管、容量瓶的正确使用及移液、守容须规范操作，配制标准溶液时，为了减少误差，取不同体积的同种溶液应用同一移液管。
(2)使用荧光分光光度计时，须按照既定程序进行。在測定系列浓度标准溶液的荧光强度时，必须按浓度由低到高的顺序放入测定。
(3)因为荧光是从石英池下部通过，所以拿取石英池时，应用手指捏住池体的上部，不能接触下部。清洗样品池后，应先用吸水纸吸干四个面的液滴，再用擦镜纸往同一方向轻轻擦拭。
(4)在测试样品时，府沣煮样品的浓府不能太高，否则由于存在荧光猝灭效应，样品浓度与荧光强度不呈线性关系，造成定量工作出现误差。