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液相色谱柱保养与维护
发布时间:2018-03-09]  阅读次数:508次

来源:分析测试百科网

每天用足够的时间来维护色谱柱,您将节省更多用于处理色谱柱故障的时间,同时您的色谱柱的寿命也会变得更长!色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关外,最主要的是与日常的维护密切相关。色谱柱的使用寿命主要是根据柱效和柱压两个指标来衡量,如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高,通常被认为该色谱柱的使用寿命已经结束。因此,延长色谱柱使用寿命的关键是,消除引起柱效下降和柱压升高的因素。通过以下几点帮助您完成色谱柱的日常维护工作。

流动相的PH值

由于硅胶基质的填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质溶解和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。由于流动相的pH控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难使色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的pH值。

去除样品和流动相中的固体颗粒

由于硅胶基质的填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质溶解和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。由于流动相的pH控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难使色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的pH值。

使用保护柱或在线过滤器

由于硅胶基质的填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质溶解和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。由于流动相的pH控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难使色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的pH值。

正确使用缓冲盐

缓冲液可以提供离子平衡的反离子,并使流动相保持一定的离子强度和p H 值,减少拖尾。缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会致其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。

正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过渡,使用后要冲洗。

具体方法如下

a . 等度条件:使用缓冲盐前用过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗20-30倍柱体积,然后再使用含有缓冲盐的流动相;使用后去除缓冲盐的方法是用过度流动相以1.0mL/min流速冲洗30倍柱体积,然后以纯有机溶液冲洗30倍柱体积保存。

b .梯度条件:用含有缓冲盐的流动相进行梯度洗脱之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗30倍柱体积,再开始梯度的运行;分析完成后,再用过渡流动相以1.0mL/min冲洗色谱柱30倍柱体积,然后以纯有机溶液冲洗30倍柱体积保存。

使用缓冲液需注意

a .避免使用盐酸盐,盐酸盐对钢质有腐蚀作用;

b .缓冲液最好要现配现用,往往缓冲液是良好的菌类培养液,隔天或放置长时间实验时会发生很多怪现象;

c .使用缓冲液要及时掌握pH范围,做到胸中有数;

d .清洗液路和柱子时,有温控可加热到30摄氏度易于冲洗;

e.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出,若有白色盐类析出,定期用10%硝酸冲洗液路(拆下柱子,冲洗30mL10%硝酸溶液,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞;

f.选择缓冲液要用可靠的试剂,避免不纯的盐类造成不必要的麻烦;

过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,但是不含缓冲盐的溶液。

防止强保留物质在色谱柱中存留

强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰形变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多样品特别是复杂样品而言,很难判断其是否含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈30倍柱体积清洗色谱柱。

色谱柱的再生

a、反相柱

以下列溶剂顺序冲洗30倍柱体积

乙腈-水(5:95) →    四氢呋喃   →   乙腈-水(5:95)

b、正相柱

以下列溶剂顺序冲洗30倍柱体积

正己烷   →  二氯甲烷  →  异丙醇   →  二氯甲烷  →  流动相

c、硅胶柱(Si)除水

30mL 2.5% 2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸正己烷溶液冲洗柱子



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