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透射电镜样品超薄切片常规制作规程
发布时间:2016-12-28]  阅读次数:1636次

来源:分析测试百科网

   1.取材:根据实验目的取材,要求部位准确,体积小于2mm3

  2.醛类固定:用2%-3%的戊二醛固定2小时

  3.清洗:用磷酸缓冲液清洗3次,每次10min

  4.锇酸固定:用1%-2%的锇酸固定2~3小时

  5.清洗:用磷酸缓冲液清洗3次,每次10min

  6.脱水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min,再用100%乙醇脱水3次,每次30min

  7.置换:用环氧丙烷或丙酮置换3次,每次30min

  8.浸渍:10hr以上,浸渍过程如下:

    ①丙酮:包埋剂=3:1的浸渍液浸渍(动物样品1hr,植物样品2~3hr)

    ②丙酮:包埋剂=1:1的浸渍液浸渍(动物样品1hr,植物样品2~3hr)

    ③丙酮:包埋剂=1:3的浸渍液浸渍(动物样品4hr,植物样品12~24hr)

    ④纯包埋剂浸渍(动物样品4hr,植物样品12~24hr)

  9.包埋:将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中;包埋剂配方中Epon812,MNA,DDSA,DMP-30的比例见附表

  10. 聚合:将包埋板置于40C、60℃条件下各聚合48hr

  11.修块:将包埋头修成梯形,且样品表面积小于0.2mm×0.2mm

  12.超薄切片:切片厚度50-90nm

  13.染色: 铀染色 5~15min清洗

        铅染色 5~10min清洗


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