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研究蛋白质相互作用的新技术
发布时间:2016-04-26]  阅读次数:442次

来源:分析测试百科网

  近期,来自多伦多大学Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute (LTRI)和Donnelly中心的一组研究人员,开发出一种新技术,可以将细胞内的DNA条形码拼接在一起,以同时搜寻数百万个蛋白质配对,用以分析蛋白质相互作用。相关研究结果发表在4月22日的《Molecular Systems Biology》杂志上。延伸阅读:蛋白质相互作用分析的新策略;研究蛋白质-RNA相互作用的新工具[新品推荐]。

  近年来,DNA条码技术使得科学家们能够进行高度并行的实验,在实验中,许多不同类型的细胞可以在同一试管中进行测试。新一代DNA测序进一步使得这一切成为可能,其可以有效地计算条形码,并“读出”结果。然而,可以组合在同一试管内的实验的数量,往往因编码细胞的类型而受到限制。能够让条形码在细胞内融合在一起,意味着科学家现在可以打破这个障碍。这一新技术,可以相同的价格,使研究人员探索发现的速度提高10倍。

  本文资深作者Frederick (Fritz) Roth指出:“使用DNA条形码,用于多路复用实验,一直是一种非常强大的技术。不过,一直都是在单维空间上,在某种意义上,我们只能每个条形码读取一次实验。通过结合细胞内的条形码,我们可以大大提高可以结合在同一试管内的实验的数量。”

  在一种广泛使用的方法(称为酵母双杂交,Y2H)中,携带一个“诱饵”蛋白的酵母细胞,与携带一个“猎物”蛋白的酵母细胞杂交。Y2H系统是可操纵的,因此,只有细胞中的“诱饵”蛋白和“猎物”蛋白质粘在一起,细胞才能生存,这使得科学家可以观察到,蛋白质与其他蛋白质之间的相互作用。Roth博士的团队将他们的新技术命名为Barcode Fusion Genetics-Yeast Two Hybrid (BFG-Y2H)。在BFG-Y2H中,携带数千个“诱饵”蛋白和“猎物”蛋白的细胞,在相同的培养物中杂交。Roth说:“为了确保每个蛋白质配对被检测用于发现相互作用,这个过程确保每一个细胞类型与所有其他细胞类型杂交。”

  作者说,BFG-Y2H方法的新颖性在于,细胞被编程为,可将来自“诱饵”细胞和“猎物”细胞的DNA条形码,连接进一个“融合条形码”。然后,使用新一代DNA测序方法,检测融合的条形码——与粘在一起的“诱饵”蛋白和“猎物”蛋白组合对应。

  蛋白质,可单独工作,或以较大的集群工作,是执行一个细胞许多作用的机械。作者说,更高效定位蛋白质相互作用的技术,可以扩大人员对于“我们的细胞是如何工作的”的理解,并揭示只发生在一定环境条件下的蛋白质相互作用。

  论文的主要作者之一、东京大学的Nozomu Yachie指出:“在一个瓶内,可以检测到数百万个蛋白质配对,用于发现蛋白质相互作用,因此,一名研究人员在实验室内,能够在不到两周时间内并行测试到几十种情况。”

  本文第一作者、LTRI 的Evangelia Petsalaki指出:“这项研究的终极目标是,生成蛋白质相互作用网络的一段‘3D视频’,而不是一个静态的画面。我们的BFG-Y2H方法,通过有效地生成更加富含信息的蛋白质相互作用图,将加速我们对于基因功能和人类疾病的理解。”


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