来源：分析测试百科网

　　核糖核苷酸是RNA的基本单位，它们会在DNA复制和修复过程中嵌入基因组DNA，进而影响基因组的稳定性。然而，迄今为止人们还无法鉴定和定位这些插入DNA的核糖核苷酸。

　　为此，乔治亚理工学院和科罗拉多大学的科学家们开发了一种新测序技术，Ribose-seq。该技术可以鉴定和分析插入基因组DNA的核糖核苷酸，适用于包括人类在内的多种生物。这一成果发表在一月二十六日的Nature Methods杂志上。

　　研究人员利用这一技术在酿酒酵母的细胞核和线粒体DNA中，绘制了核糖核苷酸的完全图谱，鉴定了核糖核苷酸插入的“热点”区域。研究显示，核糖核苷酸嵌入很普遍但并不是随机发生的。

　　“核糖核苷酸是DNA中丰度最高的非标准核苷酸，但迄今为止人们还无法确定它们的位置和类别，”乔治亚理工学院的副教授Francesca Storici说，他与科罗拉多大学的助理教授Jay Hesselberth共同领导了这项研究。“核糖核苷酸插入会改变DNA的结构和功能。”

　　核糖核苷酸里的羟基（OH）能使DNA发生扭曲，形成敏感性位点。值得注意的是，OH和碱性溶液之间的反应，会让DNA更容易被切割。Ribose-seq就是利用这一反应来检测核糖核苷酸插入事件的。

　　研究人员先在核糖核苷酸处切割DNA，然后在此基础上构建DNA文库，文库中的DNA序列包含核糖核苷酸插入位点及其上游序列。随后，他们对文库进行高通量测序，将测序读取与参考基因组进行比对，最终获得rNMP插入事件的基因组图谱。

　　“Ribose-seq能够特异性直接捕捉嵌入DNA的核糖核苷酸，”Storici指出。“这一技术适用于任何基因组DNA（从细胞核基因组、质粒DNA到线粒体DNA），不需要进行标准化。Ribose-seq还可以在DNA遭遇环境压力发生断裂和脱碱基时分析rNMP。”

　　核糖核苷酸里的羟基是ribose-seq的关键，“OH是核糖核苷酸特有的”文章的第一作者Kyung Duk Koh说。

　　研究人员在酿酒酵母中对这一方法进行了验证。“不论是核糖核苷酸的插入位点，还是核糖核苷酸的组成都存在偏好，”Koh说。“我们找到了核糖核苷酸插入基因组的一些热点。”人们可以在此基础上鉴定不稳定的基因组区域，理解它们对DNA性能和活性的影响。

　　下一步，研究人员将把ribose-seq用于其它DNA，“这一技术可以用于任何生物的任何细胞类型，只要能提取出基因组DNA，”Koh说。

　　除了DNA修复和复制以外，药物、环境压力和其它因子造成的损伤也会使核糖核苷酸插入DNA。而Ribose-seq可以帮助人们研究这些过程产生的影响。

　　“Ribose-seq能让我们更好的理解核糖核苷酸对DNA结构和功能的影响，”Storici说。“鉴定特征性的核糖核苷酸插入，可以找到人类疾病的新生物学指标，比如癌症和退行性疾病。”